但是制备PAGE电泳,上样量都是非常大,电泳时的条带非常宽,带与带之间有重叠,分辨率已下降,电泳后割带回收目的引物时,很难说不割到差别仅几个碱基的引物。国内有一个不好的现象,PAGE纯化的引物,特别是长引物要的量都比较高,导致割的条带有时可能比较宽。建议:您如果减少OD数,引物遇到的问题可能就会少一些。 16...
易位引物会在断裂点的两边进行杂交,从而确保只发生与易位有关的扩增。它们不会扩增没有易位的野生型序列。 4、多重PCR 在多重PCR策略中,可以在一个PCR反应中同时检测多个靶点。多重PCR使用2对以上的引物,在一个PCR反应中实施5对甚至10对引物,可以有效(或适当)使用试剂和仪器;相对降低了成本,减少了工作量。用于...
7.引物之间的TM相差避免超过2℃ 8.引物的3’端避免出现3个或3个以上连续相同的碱基,引物3'端要避开密码子的第3位,因密码子的第3位易发生简并,会影响扩增的特异性与效率。 9.引物的设计好后使用Blast验证 各种模板的引物设计难度不一。有的模板本身条件比较困难,例如GC含量偏高或偏低,导致找不到各种指标都十...
一般来说,引物的储存液(母液),浓度为100μM(μM就是μmol/L的意思,M=mol/L,1μM=1pmol/μL),工作液浓度一般是10μM。 实际上,引物在不同的浓度范围内都是比较稳定的,配制的浓度可以根据自己的实验要求自行决定,但总体上浓度不要低于1μM、不要高于10μM。相比于pcr里面其他的限制因素,比如模板质量,引...
1、引物最好在模板cDNA的保守区内设计。DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。2、引物长度一般在15-30碱基之间。引物长度（primer length）常用的是18-27bp，但不应大于38bp，...
修饰引物/探针是在普通引物的序列上添加了化学基团或改变了碱基与磷酸二酯键，以达到靶标检测、防止降解、增加稳定性等等目的，修饰类型有300余种，按照位置可以分为引物的3'端修饰、5'端修饰和中间修饰，通常将添加荧光标记的修饰引物称为探针。应用：1、分子生物学基础研究：包含检测、互作、功能等方向的qPCR、Fish...
1 引物设计 1.1 基因的确定 打开NCBI网址https://www.ncbi.nlm.nih.gov/,下载你所需要鉴定的Gene Symbol,这里以微生物基因 opaR 为例。 1.2 复制基因序列 点击GenBank(针对基因序列),复制下面的基因的序列。 2 Primer Premier 5设计引物 2.1 载入基因序列 ...
高纯引物 HiPure Oligos 采用生工独有的ULTRAPAGE和标准的HPLC纯化方式,适合对引物纯度要求较高的PCR实验、克隆表达研究或基因重组、反义核酸、修饰或标记引物、qPCR荧光探针和化学及物理交叉学科等下游实验应用。 纯化方式碱基范围交付形态包装形式额外QC合成周期 ...
一、引物设计的基本原则 1. 用于PCR反应的引物需要两条,分别设在被扩增目的的片段的两端,并分别与模板正负链序列互补,避免出现二聚体、发夹结构等 2. 引物的长度一般以18-25个核苷酸为宜,特殊情况下可适当增加,引物过长容易产生寡核苷酸的链内互补,形成发卡状结构,影响引物与模板之间的互补; ...