多种原因会给长片段克隆带来难题,这其中就包括传统分子生物学试剂自身的局限。Invitrogen™TOPO™XL-2完整PCR克隆试剂盒提供了克服这些限制的所有必要元素,并且能够精确,有效和简单地克隆高达13 kb的长PCR产物。通过使用拓扑异构酶活化的全新线性化pCR™-XL-2-TOPO™载体,只需在实验台上花费5分钟时间即可获得更...
轻松实现长片段的克隆 如果你的目的片段大于 5kb,那么注定你会比别人多一份艰辛.长片段的扩增与克隆都并非易事. 现在前面的问题已经基本解决了.许多 DNA 聚合酶都可以扩增长片段,30kb 也不在话下.广告说的 好,比你想象的更长.而且高保真酶的保真效率也不断提高,再也不用害怕 PCR 产物频频突变了.不过,长...
我也感觉片段太长了确实不好扩,分成几段七八百bp的片段,分别做pcr,设计引物的时候加上同源臂,扩完之后用同源重组法连起来,如果其中有一段实在扩不出来,就找公司合成这一段,几百bp的比上千bp的便宜多了 赞(1) 回应 momo 楼主 2023-07-12 09:31:07 山东 模板是自己从提RNA用反转录kit扩出来的cDNA吗...
1、引物加上同源臂---PCR---胶回收---无缝克隆---阳性鉴定 2、TOPO载体（闪电克隆，金百特生物...
分子克隆全长片段引物的设计需要遵循以下原则: 1.引物长度:引物长度通常在18-30个碱基对之间,过短可能导致特异性差,过长可能导致扩增效率下降。 2.引物GC含量:GC含量通常在40%-60%之间,过高或过低都会影响引物与目标序列的互补性。 3.引物簇合:避免引物之间形成二聚体或多聚体,以确保扩增反应的特异性。 4.引...
在分子克隆过程中,引物的设计是关键步骤之一。引物是一小段 DNA 或 RNA 序列,可以与目标 DNA 序列的两侧互补,从而允许 PCR 扩增或 DNA 合成。 引物的设计需要考虑多种因素,包括目标序列的长度、GC 含量、序列偏好性等。通常,引物设计软件可以帮助完成引物的设计,包括 Primer Blast、Oligo 等。 II.引物设计 引物...
四、克隆 DNA 序列的全长 在设计好引物后,可以通过 PCR 技术进行 DNA 扩增。在 PCR 过程中,引物与目标 DNA 序列互补结合,并通过 DNA 聚合酶的作用,使目标 DNA 序列得以扩增。经过多次循环扩增,可以获得足够长度的 DNA 片段。 五、实例说明 假设我们要克隆一个 2000 个碱基对的 DNA 序列,首先可以从 NCBI 数...
轻松完成长片段DNA克隆 轻松完成长片段DNA克隆 TOPO XL-2完整PCR克隆试剂盒 Inv itrogen™ TOPO™ X L-2完整PCR 使用Platinum SuperFi DNA 高克隆效率 克隆试剂盒提供了高效克隆超长PCR 聚合酶扩增的平末端PCR产物 pCR-X L-2-TOPO载体可实现高效克 产物(长达13 kb)所需的全部组分。该 隆(图2) ,其含有...
在分子克隆过程中,引物是关键因素。引物是一段短的 DNA 序列,可以与目标 DNA 片段的两端互补结合,从而为 PCR 反应提供起点。设计引物的方法如下: 1.确保目标基因的正确性:从 NCBI 等数据库中获取目标基因的 DNA 序列,并确保其正确性。 2.寻找起始密码子:在目标 DNA 序列中找到起始密码子,通常位于序列的上游。
1、构建的重组穿梭质粒具有既可以在酵母中复制又可以在原核细胞中复制的特点,实现含长片段DNA的质粒从酵母向原核宿主中转化; 2、可以实现含长片段DNA的质粒在异源原核宿主中的稳定存在及表达;较其他表达异源DNA长片段的方法更为快捷、高效; 3、本发明构建的质粒为低拷贝质粒,不会对异源宿主菌的基因组造成影响,亦不...