多种原因会给长片段克隆带来难题,这其中就包括传统分子生物学试剂自身的局限。Invitrogen™TOPO™XL-2完整PCR克隆试剂盒提供了克服这些限制的所有必要元素,并且能够精确,有效和简单地克隆高达13 kb的长PCR产物。通过使用拓扑异构酶活化的全新线性化pCR™-XL-2-TOPO™载体,只需在实验台上花费5分钟时间即可获得更...
1、引物加上同源臂---PCR---胶回收---无缝克隆---阳性鉴定 2、TOPO载体（闪电克隆，金百特生物...
轻松实现长片段的克隆 如果你的目的片段大于 5kb,那么注定你会比别人多一份艰辛.长片段的扩增与克隆都并非易事. 现在前面的问题已经基本解决了.许多 DNA 聚合酶都可以扩增长片段,30kb 也不在话下.广告说的 好,比你想象的更长.而且高保真酶的保真效率也不断提高,再也不用害怕 PCR 产物频频突变了.不过,长...
我也感觉片段太长了确实不好扩,分成几段七八百bp的片段,分别做pcr,设计引物的时候加上同源臂,扩完之后用同源重组法连起来,如果其中有一段实在扩不出来,就找公司合成这一段,几百bp的比上千bp的便宜多了 赞(1) 回应 momo 楼主 2023-07-12 09:31:07 山东 模板是自己从提RNA用反转录kit扩出来的cDNA吗...
分子克隆全长片段引物的设计需要遵循以下原则: 1.引物长度:引物长度通常在18-30个碱基对之间,过短可能导致特异性差,过长可能导致扩增效率下降。 2.引物GC含量:GC含量通常在40%-60%之间,过高或过低都会影响引物与目标序列的互补性。 3.引物簇合:避免引物之间形成二聚体或多聚体,以确保扩增反应的特异性。 4.引...
四、克隆 DNA 序列的全长 在设计好引物后,可以通过 PCR 技术进行 DNA 扩增。在 PCR 过程中,引物与目标 DNA 序列互补结合,并通过 DNA 聚合酶的作用,使目标 DNA 序列得以扩增。经过多次循环扩增,可以获得足够长度的 DNA 片段。 五、实例说明 假设我们要克隆一个 2000 个碱基对的 DNA 序列,首先可以从 NCBI 数...
轻松完成长片段DNA克隆 轻松完成长片段DNA克隆 TOPO XL-2完整PCR克隆试剂盒 Inv itrogen™ TOPO™ X L-2完整PCR 使用Platinum SuperFi DNA 高克隆效率 克隆试剂盒提供了高效克隆超长PCR 聚合酶扩增的平末端PCR产物 pCR-X L-2-TOPO载体可实现高效克 产物(长达13 kb)所需的全部组分。该 隆(图2) ,其含有...
[0003]针对现有技术的缺点,本发明的一个目的在于提供方便克隆长片段DNA且稳定遗传的质粒的构建方法,该方法包括如下步骤: 1)PCR扩增带有Sbf I和Not I酶切位点的TlT2-pSC101-asd片段; 2)PCR扩增带有Sbf I和Not I酶切位点的TRP1-ARS4/CEN5-Spec片段; 3)使用限制性内切酶SbfI和Not I消化步骤I)和2)所得的...
根据目标DNA序列的不同特点和需求,分子克隆全长片段引物可以有多种不同的描述方式。以下是几种常见的描述方式: 1. 前向引物和反向引物 前向引物和反向引物分别用于扩增目标DNA序列的5'端和3'端。它们的设计会考虑到目标DNA序列的方向性,以确保扩增出完整的全长片段。前向引物和反向引物通常具有互补碱基序列,以便...
如果实在不行的话，分段克隆吧，针对你的目的片段设计两对到三对引物，保证这两条或者是三条目的片段中相邻的两段上有20个左右的共同序列，然后把分别克隆出来的三个条带纯化后，在同一个PCR反应体系中反应（不用引物），最终可以得到你的长目的片段 ...