将转膜夹、海绵和滤纸浸没在含有转膜缓冲液的托盘中,在转膜夹的两面依次放置海绵和滤纸,并用滚轮擀去其中的气泡。然后小心把凝胶从玻璃板转移到转膜夹黑色面,并将PVDF膜与凝胶缓慢贴合,最后将转膜夹两面合到一起,并用白色滑块锁住夹套,形成“转膜三明治”(从负极到正极依次是海绵、滤纸、凝胶、PVDF膜、滤纸、海绵)。
转膜大量发热也是产生这种现象的一个重要原因,发热会使蛋白分子除了受到电场力的作用,自身不规则的扩散运动也会加快。 . 操作注意事项 转膜条件设置 冰浴:转膜过程会有大量的发热。所以实验室里常见这样的画面:除了转膜槽里面放冰袋,整个槽子还要埋在冰里。提前配好转膜液,丢个冰...
用于确定检测样本是否为阴性结果；（2）目的蛋白浓度过低或蛋白降解，建议提高上样量，向裂解液中加入蛋白酶抑制剂，并在冰上裂解细胞；（3）转移不完全或过转移，可使用丽春红染膜并结合考马斯亮蓝染胶，确认条带是否转移至膜上或转移过度，调整转膜的时间和电压；（4）一抗孵育时间不足，可选择...
材料条件:PVDF膜、自配转膜液、湿转 1. 胶板拆开后,把胶板在清水里简单洗一下,防止胶板上残余电泳液中SDS的干扰小分子与膜结合; 2. 自配转膜液,一般用两次,常规甲醇浓度为20%,如果跑小分子的话,可以把甲醇浓度适当增大到25-30%,跑大分子的话可以把甲醇浓度降低或者不加甲醇; 3. 为了区分膜和上样顺序,可...
1. 在转膜过程中，需要控制好转膜电压和时间，以及膜的湿度和尺寸，避免影响蛋白质的转移效率。2. 在抗体结合过程中，需要注意一抗和二抗的浓度和孵育时间，避免过度或不足结合。3. 洗涤步骤是去除未结合抗体的重要环节，需要充分洗涤，避免背景杂乱。4. 实验过程中需要保持膜的湿润，避免膜干燥影响抗体结合。5. ...
上次和大家介绍了蛋白上样和电泳,今天就给大家介绍一下电泳之后的转膜那些事。 一.配置转膜液 转膜液:700ml双蒸水,200ml甲醇,100ml10X转膜液,配置后装在容器中,然后放在4度冰箱预冷(甲醇加入水中后会产生大量热量,而温度太高会影响转膜)。 二.转膜
如果由于时间原因来不及做下面实验，可以在 4 度下 12V 转膜过夜 （2） 硝纤膜建议使用 0.22 μm 的小孔径膜，不容易转膜过头；（3） 不同的转膜装置，转移效率是不一样的，所以换用转膜装置，最好再摸个条件 （4） 转膜时电极方向注意是膜正胶负。6. 转完后将膜用 1×丽春红染液染 5 min（于脱色...
1、 在电泳结束前20min开始准备转膜所需的东西。转一张膜需准备6张的滤纸（长一般为8.1~8.3cm，宽度根据裁的胶大小实际测量，但胶一般会缩水， 所以裁8cm就行）和1张PVDF膜。切滤纸和膜时一定要戴干净手套，因为手上的蛋白会污染膜。PVDF膜使用前用无水甲醇中浸泡1min~2min。目 的是为了活化PVDF膜上面的...
Western blot是实验阶段最重要、最基础的实验,其实验步骤较多,所需时间较长,整个实验过程变量较多,是一个既简单又复杂的实验过程。今天主要分享转膜阶段常见问题及经验。 经验: 1.转膜液建议每次实验重新配,以保证转膜效率。 2.一般转膜为低温环境,因此转膜液应在整个实验开始时进行配置,配置完成后放置在冰盒中。
(2)快速稳定:能在25-30分钟完成转膜过程,产热量小,减少蛋白损失。 (3)兼容性好:兼容Laemmli胶,预制胶,FastPAGE,Bis-Tris胶等多种凝胶。 注意事项 (1)转印电流建议设定恒流400mA, 一般25-30分钟可以将150kD以下蛋白完全转印;小于100kD蛋白20分钟即可完全转印;对于大于150kD蛋白,建议延长5-10分钟。