(8)平衡酚、氯仿 (9)无水乙醇、70%乙醇、异丙醇 (10)无RNase水 三、操作步骤 (一)异硫氰酸胍法(PLT) 1.取新鲜动物组织0.1～0.2g置于组织匀浆器中,加入预冷的细胞裂解液1ml,在冰浴中迅速匀浆15～30s,以充分研碎组织。然后将细胞悬浮液吸入另一试管中。 2.加入2mol醋酸钠(pH4.0)120μl,充分混匀。 3....
答: ①基本原理:异硫氰酸胍为强烈的蛋白质变性剂,能迅速溶解蛋白质,导致细胞结构破坏,使总RNA 从细胞中释放出来;同时其为还原剂可以使内源性RNase变性失活, 防止RNA被降解。 ②步骤:用异硫氰酸胍及其他物质配置的TRIzol试剂处理细胞或者组织匀浆,用氯仿变性沉淀蛋白质,离心处理取上清液,加入异丙醇再次离心,RNA沉淀,...
1) 取植物组织5g加入液氮充分研磨,转到一支预冷50mL的 离心管 中,顺序加入:15mL 异硫氰酸胍溶液,1.5mL 2M NaAc(pH4.0),15mL水饱和酚和3mL氯仿/异戊醇。混匀后置冰上15min。 2) 4℃,15 000g 离心30min转上清于另一管中,加等体积异丙醇,混匀-20℃沉淀1hr.。 3) 4℃,15 000g 离心25min,弃去上清,加...
异硫氰酸胍法提取制备模板核酸此法主要用于RNA的提取.标本为组织细胞及血清等. 1.异硫氰酸胍消化液 异硫氰酸胍4mol/L 柠檬酸钠(PH7.0)25mmol/L 十二烷基肌酸钠0.5% β-巯基乙醇0.1mol/L 2.消化方法:用50～100ul细胞悬液及血清,加等体积的异硫氰酸胍消化液振混匀后,或65℃1小时,或室温放置数分钟,然后加1/...
异硫氰酸胍/苯酚法是一种传统的RNA提取方法,适用于大部分动 植物材料,但对于次生代谢产物较多的植物材料提取RNA效果较 差。异硫氰酸胍能使核蛋白复合体解离,并将RNA释放到溶液中, 采用酸性酚/氯仿混合液抽提,低pH值的酚将使RNA进入水相,而 蛋白质和DNA仍留在有机相,从而可以完成RNA的提取工作。
异硫氰酸胍碱裂解法是一种化学分析方法,常用于测定生物样品中的蛋白质含量。该方法利用异硫氰酸胍(DTT)和异硫氰酸盐(ITP)的作用,将蛋白质分子中的二硫键断裂成两个巯基,从而使蛋白质变为线性状态,便于后续的检测和分析。此外,该方法还可以用于蛋白质的定量、蛋白质修饰的研究以及蛋白质结构的分析等方面。该方法操作...
RNA方法-异硫氰酸胍法用异硫氰酸胍法提取RNA 一、试剂配制 1.变性液buffer(灭菌100ml DEPC水) 1.1柠檬酸钠:0.75Mbuffer22.06g 将柠檬酸钠加入超纯水中,待完全溶解,用HCI调节pH值至7.0。加ddH2O定容到100 mL 1.2十二烷基肌氨酸钠buffer:10%10g 0.1%DEPC水配制以后,高温高压灭菌。 2.变性液(500ml现配) 0.75mol...
RNA的种类来源比较多,提取制备的方法各异,一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法,其中最常用的是苯酚法,即Trizol法提取RNA。异硫氰酸胍作为强的阴离子表面活性剂,可以有效的解离核蛋白与核酸的复合体,并对RNase产生强烈的抑制作用,保持RNA的完整性。加入氯仿等试剂并离心,上层清液用异丙醇沉淀回收总RNA。组织细胞RNA提取...
异硫氰酸胍法提取原理 dna在上清液吗网友 1 最佳答案 回答者:网友 一、实验原理 真核生物的一切有核细胞(包括培养细胞)都能用来制备基因组 DNA。真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内,因此,制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离,又要保持DNA分子的完整。推荐...
植物总RNA的提取（异硫氰酸胍法）1．取1.2g绿叶，液N中研磨成冻粉，装入预冷的50ml离心管中，置冰上，加4ml 4M的异硫氰酸胍，混匀后加3ml Tris饱和酚，混匀后加0.3ml 2M的NaAc（pH4.8），0.6ml 三氯甲烷（CHCl3），混匀后振荡，置冰上30min。2．取出离心管，于4℃ 8000rpm离心13min，上清液移于另一...