IRES双顺反子双顺反子载体利用RT-PCR扩增出口蹄疫病毒小核糖体进入位点(IRES)序列,并定向克隆进pcDNA3.1(+)载体,构建成双顺反子真核表达载体.为了验证该载体是否能够转录出双顺反子mRNA,在IRES起始密码(ATG)下游正确插入增强型的绿色荧光蛋白基因(egfp),把重组质粒转染BHK-21细胞,培养20—48h,在紫外显微镜下观察...
利用RT-PCR扩增出口蹄疫病毒小核糖体进入位点(IRES)序列,并定向克隆进pcDNA3.1(+)载体,构建成双顺反子真核表达载体.为了验证该载体是否能够转录出双顺反子mRNA,在IRES起始密码(ATG)下游正确插入增强型的绿色荧光蛋白基因(egfp),把重组质粒转染BHK-21细胞,培养20—48h,在紫外显微镜下观察,能够看到典型的绿色荧光,表...
本实验首先利用巢式PCR的方法扩增出肌生成抑制素Myostatin基因的编码区,并将该片段连入到乙肝表面抗原HBsAg基因的3'末端,用以增加其免疫原性.而后将其连接到真核表达载体pEF1α-IRES-DsRed-Express2上,成功得到肌生成抑制素与乙肝表面抗原融合表达质粒pEF1α-DsRed-S-MSTN.将该融合质粒转染到牛胎儿成肌细胞中,...
重不平衡。如病毒源IREsencephalo州ocarditjs (EcMv)mEs曾被用于构建多顺反子,但是由于存 在一些缺陷严重影响了其在多顺反子载体构建中的 同的是,这类2A在其N端剪切多聚蛋白前体,形成 应用”。91,主要有:(1)IRES介导的上下游基因表达 不平衡,通常下游基因的表达量仅是上游的20%到 P1蛋白和2A.P2蛋白。
含FMDV2A序列PRRSV GP5和M蛋白 重组腺病毒的构建与鉴定＊ 云 涛1,2,倪 征2,余 斌2,陈 柳2,华炯钢2,王根荣3,张彦明1,刘光清2 (1西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌712100;2浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所,浙江杭州310021;3嘉兴市秀城区畜牧兽医站,浙江嘉兴314005)[摘 要] 【目的】构建表达...
传统的构建多顺反子的工具,如IRES等,由于存在结构大,上下游基因表达差异显着等缺陷,严重限制了其应用.FMDV2A,因其具有结构小,剪切效率高等优点为多基因治疗带来了新的希望.主要介绍了FMDV2A的特性,"剪切"活力及其在构建多顺反子载体中的应用.关键词FMDV2A,多顺反子,基因治疗,肿瘤中图分类号Q789文献标识码A文章...
Rescue of internal initiation of translation by RNA complementation provides evidence for a distribution of functions between individual IRES domains Picornavirus RNAs initiate translation using an internal ribosome entry site (IRES)-dependent mechanism. The IRES element of foot-and-mouth disease virus (....
A sequence corresponding to the critical 30 bp region that forms a stem-loop structure in IRES was also selected for investigation. The regions selected for shRNA were designated as D1, D2, D3, and D4. The virus in the supernatant was titrated in BHK-21 cells to determine infectivity. ...
This approach has been beneficially used in two reported instances involving FMDV, where artificial miRNAs were constructed that targeted either the IRES sequence in the 5’ NTR or the coding sequence for the 3D polymerase [30, 31]. When these constructs were transfected into cell culture prior ...
本实验首先利用巢式PCR的方法扩增出肌生成抑制素Myostatin基因的编码区,并将该片段连入到乙肝表面抗原HBsAg基因的3'末端,用以增加其免疫原性.而后将其连接到真核表达载体pEF1α-IRES-DsRed-Express2上,成功得到肌生成抑制素与乙肝表面抗原融合表达质粒pEF1α-DsRed-S-MSTN.将该融合质粒转染到牛胎儿成肌细胞中,...