在构建慢病毒表达载体时,摇完菌提质粒酶切。在进行第二次酶切后,插入的目的条带电泳没有显示。这是为什么呢 本人构建完后提质粒先进行PCR验证过,扩增出了目的条带大小的片段,在第一步酶切时,电泳显示条带大小在10,000bp附近(我的载体为7.8kb, insert 为2250p)。后来分别用两个酶酶切后,大小也对。 我该...
但是没有得到目的条带。网友 1 最佳答案 回答者:网友 我觉得用elution buffer没太大的影响,如果你非要觉得不好的话,只能在转化一遍重新提质粒或者抽成干粉再加水。我们一般用水就行。实在不行去测序呀。提的质粒和空质粒可以比较,如果你插入的基因足够大,实在不行多跑跑。然后看大小比较。酶切的话还是要看你...
不会有太多区别，可以双酶切后看条带数：重组质粒酶切后有两条带。3.一般酶切建议：37°C，3-4...
构建了敲除载体，最后用双酶切验证，发现小量双酶切4小时后跑胶没有条带。maker都跑出来了。按常理...
电泳缓冲液是不是新配的啊？Marker都有问题的话，提质粒，酶切应该没问题。关键是电泳那出问题了，排查下电泳
PCR存在假阳性，应该以酶切结果为准！有时候个别克隆酶切位点会有突变，这也是不能用的！质粒作为模板...
有一株菌有明显条带，但是提取质粒进行双酶切验证却没有切成功，用引物对质粒进行PCR，有两条非常明显...
提的质粒和空质粒可以比较，如果你插入的基因足够大，实在不行多跑跑。然后看大小比较。酶切的话还是要...