荧光素酶互补(LCl)是一种蛋白质组学技术,它可以用来研究蛋白质之间的相互作用,这种技术给予荧光素酶原理,通过观察荧光信号来评估蛋白质之间的相互作用。▼应用场景在蛋白质组学、细胞生物学和药物研究中有广泛的应用。▼实验原理来自萤火虫的荧光素酶可以分成 N 和 C 两段蛋白质而没有酶活,将 N 和 C 端各融合...
这种技术基于荧光素酶(FRET)原理,通过观察荧光信号来评估蛋白质之间的相互作用。 荧光素酶互补技术的基本流程如下: 将两个蛋白质分别标记为不同颜色的荧光素酶。 将两个蛋白质混合在一起。 通过荧光成像技术观察两种不同颜色的荧光信号。 观察荧光信号的变化来评估两个蛋白质之间的相互作用。 荧光素酶互补技术的...
萤火虫荧光素酶片段互补成像技术(LCI)是近年来形成的研究蛋白互作的新技术,把2个目标蛋白分别连接于萤火虫荧光素酶的C端 (CLuc:398–550 aa)和N端(NLuc:2–416aa)。如果2个蛋白互作,N段和C端接近形成有活性的荧光素酶,荧光素酶分解萤光素底物并产生荧光。 将LCI技术与烟草瞬时表达技术相结合来研究植物蛋白的相...
【利用荧光素酶互补实验验证植物蛋白互作】 基本原理 在验证植物蛋白互作时,荧光素酶互补实验 (Luciferase Complementation Assay, LCA) 因其高灵敏度、可定量化、操作简单高效被广泛应用于植物学和动物学蛋白质互作研究。 目前, 应用最为广泛的荧火素酶基因来源于北美萤火虫 (firefly luciferase), 该基因编码550个氨基...
在验证植物蛋白互作时,荧光素酶互补实验 (Luciferase Complementation Assay, LCA) 因其高灵敏度、可定量化、操作简单高效被广泛应用于植物学和动物学蛋白质互作研究。 目前, 应用最为广泛的荧火素酶基因来源于北美萤火虫 (firefly luciferase), 该基因编码550个氨基酸组成的荧火素酶蛋白 (大小为62 kDa)。
荧光素酶互补实验(LCI,luciferase complementation imaging)可以用于蛋白质-蛋白质相互作用的研究。萤火虫荧光素酶(LUC,luciferase)可以分为N端和C端两部分,单独的两部分不能自发地重组和发挥功能。只有分别融合了N端和C端的两个蛋白发生相互作用时,LUC的两部分在空间上相互靠近,产生有功能的重组LUC,催化荧光素酶底物...
【利用荧光素酶互补实验验证植物蛋白互作】 基本原理 在验证植物蛋白互作时,荧光素酶互补实验 (Luciferase Complementation Assay, LCA) 因其高灵敏度、可定量化、操作简单高效被广泛应用于植物学和动物学蛋白质互作研究[2]。 图片来源[2] 目前, 应用最为广泛的荧火素酶基因来源于北美萤火虫 (firefly luciferase), ...
双荧光素酶的阴性 首先这项检测技术对于miRNA与mRNA靶向结合位点验证是非常适用的。但苦恼的是在检测lncRNA/miRNA或circRNA/miRNA时常为阴性的结果。 主要的原因有: (1) 生物信息学预测得到的潜在结合位点单一。通常一个miRNA会靶向多个靶基因,或与lncRNA/circRNA存在多个结合位点。同时,由于各预测数据库算法的不同,...
在验证植物蛋白互作时,荧光素酶互补实验 (Luciferase Complementation Assay, LCA) 因其高灵敏度、可定量化、操作简单高效被广泛应用于植物学和动物学蛋白质互作研究[2]。 图片来源[2] 目前, 应用最为广泛的荧火素酶基因来源于北美萤火虫 (firefly luciferase), 该基因编码550个氨基酸组成的荧火素酶蛋白 (大小为62...
此外, 荧光共振能量转移技术广泛用于研究蛋白分子间的距离及其相互作用, 相对于双分子荧光互补技术, 荧光共振能量转移技术需要更精密的仪器, 且操作更复杂(Ha et al., 1996; Bhat et al., 2006)。荧火素酶互补实验 (Luciferase Complemen...