产生这种现象的主要原因是核酸酶污染,除了在制备时容易引入外源核酸酶之外,质粒宿主细胞也会影响抽提质量,JM系列细胞中含有丰富的核酸酶活性,如果制备的质粒需要长期保存,建议更换宿主细胞,如DH5α、XL1-Blue,用于抽提高质量质粒。 06 Q:之前测序没问题的菌液,37℃扩大培养后,质粒的大小或序列出现异常? 这种情况一般...
当使用pET等低拷贝载体时,由于载体拷贝数影响导致质粒DNA提取量低,可以使用更多的菌量分开收集裂解再统一纯化或统一收集,但需要相应增加溶液使用量。 3. 菌盘放置时间过长 用于质粒抽提的单克隆应当是新鲜涂盘生长的,刚活化的菌比-80℃保存菌种所培养来的菌液状态好,并且保存时间过长的菌株可能会造成质粒浓度低,质...
注意:吸附柱平衡后可最大限度激活硅基质膜,提高质粒的得率;吸附柱平衡后应立即使用,长时间放置会影响其吸附效果。 02 收菌:将过夜培养的菌液用8000 g,2-3 min低温离心,吸弃液体培养基; 注意:高拷贝的质粒,需要5-15 mL的培养菌液;低拷贝的质粒,则需要15-30 mL的培养菌液;残留的液体培养基过多会影响细菌...
建议:请选用含内源核酸酶的宿主菌株质粒DNA提取试剂盒,或者转化质粒到不含内源核酸酶宿主菌株中。 3.加样时DNA飘出加样孔外 原因:柱中残留乙醇未除干净。 建议:洗脱质粒DNA前确保无乙醇残留在柱子上。可再离心或者抽真空。 4.提取质粒后,做转化,转不出来?
钟鼎质粒抽提服务特色 我公司依据客户需求,可以提供多种类型的质粒DNA抽提服务,制备的质粒DNA没有RNA的污染,内毒素可低于50EU/mg,蛋白质小于3ug/mg质粒DNA,基因组DNA小于10ng/mg质粒DNA,OD260/OD280介于1.85-1.90之间,超螺旋的比例达到90%以上,满足您的不同实验需要。 质粒抽提技术服务报价及周期 质粒抽提技术...
1、质粒DNA的分子大于15kb时，在质粒抽提过程中容易受损，可以采用比较温和的裂解方法，将细菌悬浮于等渗的葡萄糖溶液中，加入溶菌酶和EDTA破坏细胞壁和细胞膜，这样可以缓解高渗透压的细菌在释放质粒DNA时的压力，保护质粒DNA。2、小分子的质粒DNA可以选用相对剧烈的方法来分离DNA。可以用煮沸法，碱裂解法或者加入溶菌...
质粒存在于许多细菌以及酵母菌等生物中,是细胞染色体外能够自主复制的很小的环状DNA分子。 质粒抽提 从细菌中分离质粒DNA的方法包括3个基本步骤:培养细菌使质粒扩增;收集和裂解细菌;分离和纯化质粒DNA。采用强碱液、加热或溶菌酶(主要针对革兰氏阳性细菌)可以破坏菌体细胞壁,十二烷基磺酸钠(SDS)和 TritonX-100(一般很...
质粒抽提 从细菌中分离质粒DNA的方法包括3个基本步骤:培养细菌使质粒扩增;收集和裂解细菌;分离和纯化质粒DNA。采用强碱液、加热或溶菌酶(主要针对革兰氏阳性细菌)可以破坏菌体细胞壁,十二烷基磺酸钠(SDS)和 TritonX-100(一般很少使用)可使细胞膜裂解。经溶菌酶和SDS或 Triton X-100处理后, 细菌染色体DNA会缠绕附着...
质粒提取的方法主要根据质粒DNA分子量的大小,所用细菌的种属,细菌裂解释放DNA后的纯化方法和实验要求来选择。 1、质粒DNA的分子大于15kb时,在质粒抽提过程中容易受损,可以采用比较温和的裂解方法,将细菌悬浮于等渗的葡萄糖溶液中,加入溶菌酶和EDTA破坏细胞壁和细胞膜,这样可以缓解高渗透压的细菌在释放质粒DNA时的压力...