荧光定量PCR中,为了消除基因组DNA对实验的影响,引物设计时一般会选择跨内含子;值得注意的是,如果对引物是否跨内含子有要求,必须选择序列登录号的方式导入基因序列,程序才能自动识别外显子的拼接位点。 “No preference”代表无要求,“Primer must span an exon-exon junction”代表引物必须跨越跨内含子,“Primer may ...
6、我这里点击“NM_000633.3”,会进入基因序列信息详情页,如图1,下拉页面,找到“CDS”字样点击后,会跳转至CDS区域的基因序列信息。CDS是编码区域,一般设计引物,尽量选择CDS区域。 7、找到CDS区域后,即可进行引物设计了,首先复制CDS区域的基因序列,然后上拉页面至顶端点击右侧“Pick Primers” 8、进入引物设计详情页面...
1、引物最好在模板cDNA 的保守区内设计 DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因,通过序列分析软件(比如DNAman)比对(Alignment),各基因相同的序列就是该基因的保守区。 2、引物长度一般在15~30 碱基之间 引物长度(primer length)常用的是18-27 bp,但不应大于38,因为过...
6、引物的产物大小不要太大,80～150 bp最为合适。 三、引物设计后的NCBI BLAST引物验证 BLAST的作用应该是通过比对,发现你所设计的这个引物,除了和你的目标基因之外,还有没有和其他物种或其他序列当中存在相同的序列; 如和你的目标序列之外的序列相同的序列,则可能扩出其他序列的产物,那么这个引物的特异性就很差,...
打开程序首先进入的是序列编辑参看,与Plasmid Premier 相比,其多了一个语音校正的功能,即在输入序列的时候,程序自动将碱基读出,以便用户进行校正,保证输入的正确和快速。 点击该界面的按钮即可进入到程序的引物设计窗口。 该界面共分为四层,最上面一层左面是5 个控制按钮,用于...
通过NCBI设计引物:以catalase基因为例。 (1) 于NCBI官网找到目的基因特定种属的CDS序列。 进入NCBI官网https://www.ncbi.nlm.nih.gov/,选择nucleotide,输入基因名称,同时输入研究种属以便更快速找到目的基因。 Research 之后,出现以下界面。核对基因名称和种属之后,点击“RefSeq transcripts” ...
怎样用primer premier5.0软件设计引物序列,rimerremier5.0是一款功能很强大的软件,在分子生物学研究中被广泛运用。常被用于PCR反应中最重要的一环———引物设计过程。引物的好坏直接能关系到PCR实验的成功与否,同时在设计引物的时候也需要满足种种条件,因此利用该软件的
我们需要的是CDS区域的序列,因此点击CDS,就会将属于CDS的序列显示出不同的颜色: 点击最底下的FASTA下载fasta文件: 跳转到FASTA之后,按照以下步骤下载: 用记事本打开后是这样的: 2.2使用primer premier 6设计引物 打开primer premier 6软件,按照以下步骤导入fasta文件。注意,可以把多条序列放入同一个文件之中,这样可以...
获取目标基因启动子、5'UTR、CDS区、3'UTR、内含子区序列 3386 -- 3:24 App 设计克隆引物 1153 -- 3:44 App 如何在NCBI设计引物 5946 -- 11:14 App 从NCBI下载物种的全基因组序列 2608 -- 3:44 App 3分钟-NCBI设计引物 3.2万 4 17:57 App 生物信息学分析:保守基序和基因结构分析 2157 19...
例题一:引物序列设计 为了扩增目标基因的特定片段,我们需要设计一对引物,以下是目标基因的序列,请根据该序列设计两个引物,使其具有以下要求: -引物长度在 18-25 个碱基对之间 -引物的 3'端碱基 G或 C -引物的理论 Tm在 55-65℃之间 目标基因序列: AGTCGATCGATTAGCGATCGAGTCGATCGATCGGCTACGATCGA 解答: ...