1. 优化引物设计:在设计引物时,尽量避免引物之间存在互补序列,降低引物二聚体形成的可能性。 2. 调整引物浓度:适当降低引物浓度,减少引物之间的碰撞几率。 3. 优化退火温度:通过梯度PCR确定最佳退火温度,使引物与模板的结合效率最大化。 4. 改进反应体系:调整反应体系中的离子强度、pH值等参数,以减少引物二聚体的...
引物重新设计。还有一个方法,就是回收目的条带,然后用回收后的产物为模板,再次扩增。
一般常见情况是引物加过量了,在溴酚蓝位置常见亮带,在这中情况下,你不需要理他,若需要漂亮图片(发论文),2办法:可以减少引物加入量,同时稍微降低镁离子浓度;或者在保证底物不缺乏情况下,增加几个循环 就可以消除引物带.
从电泳图片看,不仅是引物二聚体的问题,是产物的特异性不好。可以试着跑下引物,看是否有条带或被降解,再有就是设置pcr的条件,试着提高退火温度。最主要的就是2个东西:引物的结合效率和模板的质量。