为了纯化寡核苷酸成为天然的DNA结构,首先必须去除保护基团,通过浓氨水处理,合成的寡核苷酸从固相载体上分离,苯甲酰基和异丁基等保护基团被去除,必要的去保护步骤完成后,寡核苷酸混合物还包含几种必须被去除的小分子有机化合物,所有非必须有机化合物被移除的过程通常叫做脱盐。 2、OPC柱。 OPC柱中装有对DMT具有亲和...
寡核苷酸的纯化 一、原理(1)无机离子与多肽结合生成沉淀。(2)用磁力分离法分离。(3)用离子交换树脂处理,使树脂上结合的多肽变成盐而被分离出来。 1、醇,醚,苯酚,三氯乙酸,氨水等与多肽反应。2、多肽和硅胶或明胶结合。3、多肽在带正电荷的纤维素或聚酰胺作用下,吸附于带负电荷的离子交换树脂柱上,交换树脂被...
纯化工艺方面,常见的寡核苷酸纯化方法是反向层析(RP)和阴离子交换层析(AEX),其中,我们更推荐阴离子交换层析(AEX),原因:一是避免了使用高成本含有机溶剂的洗脱液,无需配备防爆设备,还可减少废液处理的费用;二是原理简单,易于放大,可以有效地与带负电荷的寡核苷酸结合。Fig3. 寡核苷酸纯化工艺流程 通常...
寡核苷酸纯化解决方案 Agilent PLRP-S 和 PL-SAX HPLC 色谱柱 PL-SAX 1000 Å 孔径 1000 Å R + + R + R + R PLRP-S 1000 Å 孔径 1000 Å 为提高可扩展性而设计 无论您的工作地点是实验室还是生产车间,Agilent PLRP-S 和 PL-SAX 色谱柱都能为您 提供出色的稳定性和重现性.此外,它们有多...
博格隆BestPoly 15Q是一款聚苯乙烯-二乙烯基苯材质的强阴离子填料,平均粒径15μm,化学性质稳定、刚性强,可在高pH条件下操作,高pH可以避免单链自互补或者富含GC寡核苷酸聚集。本案例使用博格隆BestPoly 15Q对合成后的寡核苷酸进行纯化,最终纯度90%以上样品占比可达52%。
图1. 采用安捷伦自动纯化软件实现自动化纯化工作流程 安捷伦针对寡核苷酸制备,主要工作流程包括: 1、在分析柱上,进行目标化合物确认和分析方法筛选; 2、将分析数据导入到自动纯化软件中,指定目标化合物并生成“聚焦”制备梯度; 3、在制备柱上进行纯化; 4、自动纯化软件将需要分析的馏分自动生成序列表,以进行馏分分析...
因此,超声波在生物学中应用于寡核苷酸纯化,成为新世纪科学发展的必然趋势。 【三、实验步骤】1。准备工作1)称取2g寡核苷酸。2)称取2g琼脂糖。3)称取2g柠檬酸钠。2。试剂配制准备洗涤液。1)0.02mol/L氯化钠溶液,pH为7。2)0.1mol/L氢氧化钠溶液,pH为10。3)0.05mol/L磷酸二氢钠溶液,pH为7。4)蒸馏水,...
OPC纯化 因为DMT基团有强的亲脂的特性,基于5’-DMT基团的寡核苷酸与反相树脂有亲和性,因此反相亲和...
纯化工艺方面,常见的寡核苷酸纯化方法是反向层析(RP)和阴离子交换层析(AEX),其中,我们更推荐阴离子交换层析(AEX),原因:一是避免了使用高成本含有机溶剂的洗脱液,无需配备防爆设备,还可减少废液处理的费用;二是原理简单,易于放大,可以有效地与带负电荷的寡核苷酸结合。
通过对pH,流速,洗脱方式,不同规模放大的优化和验证,Nuvia HP Q可以有效的把ON1(20-mer)和ON2(21-mer)寡核苷酸分离,对寡核苷酸纯化过程中存在的关键的难分离的产品相关杂质(n-x ,n+x)做到很好的分离和去除,不同层析规模实验数据显示,纯度可以达到97%,回收率达到90...