聚丙烯酰胺凝胶电泳（ polyacrylamide gel electrophoresis，简称PAGE），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术，用于分离蛋白质和寡核苷酸。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合的常用方法有两种：化学聚合法和光聚合法。化学聚合以过硫酸铵（APS）为催化...
脉冲场凝胶电泳可以用来分离大小从10kb到10Mb的DNA分子。制备加工 1．收集10ml全血，加入30ml细胞裂解液。置冰浴中至少20min直至红细胞完全溶解。2．2000r/min离心10min，移去红色上清液，再次用细胞裂解液洗涤细胞，然后用PBS重悬细胞。3．稀释单细胞悬液并取一小份用Neubauer腔计数细胞。4．用PBS重悬细胞，以达到4...
1、 跑胶时候marker 可以加成定量marker,如1kb、100bp等marker,按说明书的量上样电泳,如加500ng量的DNA marker,电泳完毕后,就可将目的DNA条带和MARKER 条带的亮度做个大致的比较,找出两者最接近亮度的条带。因为marker的各条带都已知所含的DNA浓度(说明书中详细注明),因此根据条带的亮度、大小大致就可推测目的...
对于琼脂糖凝胶电泳，浓度通常在0.5～2%之间，低浓度的用来进行大片段核酸的电泳，高浓度的用来进行小片段分析。低浓度胶易碎，小心操作和使用质量好的琼脂糖是解决办法。注意高浓度的胶可能使分子大小相近的DNA带不易分辨，造成条带缺失现象。缓冲液 常用的缓冲液有TAE和TBE，而TBE比TAE有着更好的缓冲能力。电泳...
sds-page凝胶电泳原理：根据检体中蛋白质分子量大小的不同，使其在电泳胶中分离，SDS是阴离子去污剂，作为变性剂和助溶试剂，它能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白分子的二、三级结构。SDS-PAGE凝胶电泳是一种可以根据蛋白质的分子量分离样本中蛋白的技术，在电荷的影响下分离大分子称为电泳（...
A：主要出现在蛋白质垂直电泳槽中，一般是两板之间的底部间隙气泡未排除干净。处理办法：可在两板间加入适量缓冲液，以排除气泡。Q：为什么带出现拖尾现象?A：主要是样品融解效果不佳或分离胶浓度过大引起的。处理办法：加样前离心;选择适当的样品缓冲液，加适量样品促溶剂;电泳缓冲液时间过长，重新配制;降低凝胶...
双向电泳的第二向是将IPG胶条中经过第一向分离的蛋白转移到第二向SDS．PAGE凝胶上，根据蛋白相对分子质量或分子量(MW)大小与第一相垂直的分离。蛋白质与十二烷基硫酸钠(SDS)结合形成带负电荷的蛋白质．SDS复合物，由于SDS是一种强阴离子去垢剂．所带的负电荷远远超过蛋白质分子原有的电荷量，能消除不同分子之间...
PAGE是一种技术,根据蛋白质等大分子的电泳迁移率(即分析物向相反电荷的电极移动的能力)来分离它们。在PAGE中,这由分子的电荷、大小(分子量)和形状决定,分析物通过聚丙烯酰胺凝胶中形成的孔隙移动。 与DNA和RNA不同的是,蛋白质的电荷根据所加入的氨基酸而不同,这可能影响它们的运行方式。氨基酸串也可能形成二级结构...
1.琼脂糖胶制作时溶胶不完全以致琼脂糖颗粒残留不均匀、有污染或琼脂糖质量不好;2.制胶过程中破坏了点样孔;3.移胶过程使胶孔偏移;4.电压太高,通常情况下电压越低,走出的电泳条带越平整。低电压电泳时,电泳缓冲液也不容易发烫,也能确保在电泳的过程中凝胶不会变形。当然电压太低,等待电泳结果的时间就会延长...