一对引物之间不应有多余四个连续碱基互补。同时,引物自身不应存在互补序列。 ③引物3`端 引物的延伸从3`端开始,3`端不能进行任何修饰,也不能有形成任何二级结构的可能。同事引物3`端应该尽量避免为T,尤应避免连续两个或两个以上的T。 ④引物5`端 引物5`限定PCR产物的长度,但对扩增特异性影响不大,所以可以...
简述PCR引物设计的原则。相关知识点: 试题来源: 解析 特异性:针对靶序列的特异性区域设计引物,引物与其他非目的DNA序列同源性不超过70%。3′末端不要有连续8个碱基与非目的基因序列同源。长度:引物的长度一般为18~24个核苷酸。二级结构:二条引物自身或引物之间(尤其在3'-OH末端)一般不应存在互补序列,以免形成二级...
百度试题 结果1 题目请简述PCR反应中引物设计的原则。相关知识点: 试题来源: 解析 答案:PCR反应中引物设计的原则包括:引物与模板DNA序列互补、引物长度适中(通常20-30个碱基)、Tm值接近、避免引物二聚体和非特异性扩增等。反馈 收藏
1.用于PCR反应的引物需要两条,分别设在被扩增目的的片段的两端,并分别与模板正负链序列互补;2.引物的长度一般以18-25个核苷酸为宜,引物过长容易产生寡核苷酸的链内互补,形成发卡状结构,影响引物与模板之间的互补;3.两条引物之间尤其在3’端的序列不能有互补,以免形成引物二聚体;4.引物的碱基组成应平衡,避免出现...
PCR引物设计的原则?相关知识点: 试题来源: 解析 引物与模板的序列要紧密互补。引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构。引物不能在模板的非目的位点引发DNA 聚合反应(即错配)。引物的长度一般为15-30 bp,常用的是18-24 bp,但不应大于38。对引物的修饰一般是在5’端增加酶切位点。尽可能少的引物二聚...
(1)引物长度一般为15～30个核苷酸。(2)碱基随机分布避免出现嘌呤、嘧啶的堆积现象。GC的含量为45%～55%。正向和反向引物具有相似的T m 值。T m =4(G+C)+2(A+T)。引物长度要确保解链温度不低于54℃。(3)避免形成发夹结构引物自身存在的连续互补序列一般不超过3 bp。 (4)两个引物之间不应存在互补序列尤...
PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列,引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。设计引物的主要原则:(1)引物长度应大于16个核苷酸,一般为20~24个核苷酸;(2)引物与靶序列间的T值不应过低(一般不低于55℃);(3)引物不应有发夹结构,即不能有4bo以上的回文序列;(4)...
试述PCR引物设计原则?相关知识点: 试题来源: 解析 答:PCR引物设计原则如下: 1)引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性; 2)产物不能形成二级结构; 3)引物长度一般在15~30碱基之间; 4)G+C含量在40%~60%之间; 5)退火温度需要比解链温度低5℃。
做Real Time时，用于SYBR Green I法时的一对引物与一般PCR的引物，在引物设计上所要求的参数是不同的。引物设计的要求：1）避免重复碱基，尤其是G。2）Tm=58-60度。3）GC=30-80%。4）3'端最后5个碱基内不能有多于2个的G或C.5）正向引物与探针离得越近越好，但不能重叠。6）PCR扩增产物长度： 引物的...