一对引物之间不应有多余四个连续碱基互补。同时,引物自身不应存在互补序列。 ③引物3`端 引物的延伸从3`端开始,3`端不能进行任何修饰,也不能有形成任何二级结构的可能。同事引物3`端应该尽量避免为T,尤应避免连续两个或两个以上的T。 ④引物5`端 引物5`限定PCR产物的长度,但对扩增特异性影响不大,所以可以...
引物长度要确保解链温度不低于54℃。(3)避免形成发夹结构引物自身存在的连续互补序列一般不超过3 bp。 (4)两个引物之间不应存在互补序列尤其应避免3'端的互补重叠。(5)引物的碱基序列不应与非扩增区域有同源性。(6)引物3'端碱基一定要与模板DNA配对最佳碱基选G和C。(7)引物的5'端可以修饰如加限制酶位点引入...
引物的5' 端决定着PCR产物的长度，它对扩增特异性影响不大。因此，可以被修饰而不影响扩增的特异性。引物5'端修饰包括：加酶切位点；标记生物素、荧光、di高辛、Eu3+等；引入蛋白质结合DNA序列；引入点突变、插入突变、缺失突变序列；引入启动子序列等。引物的延伸是从3'端开始的，不能进行任何修饰。3'端也不...
简述PCR引物设计的原则。相关知识点: 试题来源: 解析 特异性:针对靶序列的特异性区域设计引物,引物与其他非目的DNA序列同源性不超过70%。3′末端不要有连续8个碱基与非目的基因序列同源。长度:引物的长度一般为18~24个核苷酸。二级结构:二条引物自身或引物之间(尤其在3'-OH末端)一般不应存在互补序列,以免形成二级...
1.用于PCR反应的引物需要两条,分别设在被扩增目的的片段的两端,并分别与模板正负链序列互补;2.引物的长度一般以18-25个核苷酸为宜,引物过长容易产生寡核苷酸的链内互补,形成发卡状结构,影响引物与模板之间的互补;3.两条引物之间尤其在3’端的序列不能有互补,以免形成引物二聚体;4.引物的碱基组成应平衡,避免出现...
百度试题 结果1 题目请简述PCR反应中引物设计的原则。相关知识点: 试题来源: 解析 答案:PCR反应中引物设计的原则包括:引物与模板DNA序列互补、引物长度适中(通常20-30个碱基)、Tm值接近、避免引物二聚体和非特异性扩增等。反馈 收藏
【解析】答:设计引物主要原则为:①引物长度应大于16个核苷酸,一般为20-24个核苷酸; ② 引物与靶序列间Tm不应过低(一般不低于55℃);③引物不应有发夹结构,即不能有4bp以上的回文序列;④两引物间不应有大于4bp以上的互补序列或同源序列,在3'端不应有任何互补的碱基; ⑤ 引物中碱基的分布尽可能均匀,G+C含量...
试述PCR引物设计原则?相关知识点: 试题来源: 解析 答:PCR引物设计原则如下: 1)引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性; 2)产物不能形成二级结构; 3)引物长度一般在15~30碱基之间; 4)G+C含量在40%~60%之间; 5)退火温度需要比解链温度低5℃。
PCR引物设计的原则?相关知识点: 试题来源: 解析 引物与模板的序列要紧密互补。引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构。引物不能在模板的非目的位点引发DNA 聚合反应(即错配)。引物的长度一般为15-30 bp,常用的是18-24 bp,但不应大于38。对引物的修饰一般是在5’端增加酶切位点。尽可能少的引物二聚...