RPA原理是利用一种特殊的酶体系,在等温条件下,特异性地扩增目标DNA序列。该酶体系由一个主要的酶(聚合酶)和多个辅助酶组成,可以在温度为37-42℃的条件下进行。 RPA扩增的原理与PCR类似,都是使用一对引物将目标序列扩增成数以百万计的复制品。但是,RPA使用的酶体系不同于PCR,主要包括一种重组蛋白(recombinase)、...
RPA技术的扩增原理基于重组酶、单链DNA结合蛋白和聚合酶三个关键酶的协同作用。在反应开始时,RPA酶不需要热能,即可在双链DNA的萎缩端发生结合,形成核酸蛋白复合物,这是RPA技术扩增的第一步。接着,DNA结合蛋白和重组酶在单链DNA的离子环境下协同作用,推动单链DNA进行局部解旋。聚合酶则利用解旋后的单链DNA作为模板...
RPA的目标是在等温条件下扩增特定的核酸序列。其主要原理基于两个关键组分:寡核苷酸引物和核酸酶。引物包括一个引导引物(primer)和两个酶拆分引物(probe),它们都与目标序列互补。在反应开始时,引物与DNA模板的目标序列结合形成引物-模板复合物。外源的核酸酶通过切割酶拆分引物的作用将其离解,并释放出一个能够启动下...
原理:针对靶基因的6个区域设计4种特异引物,在链置换DNA聚合酶(Bst DNA polymerase)的作用下,基因模板、引物、链置换型DNA合成酶等在60--65℃进行恒温扩增,15-60分钟左右即可实现10^9～10^10倍的核酸扩增。 环介导等温扩增法,是一种新型的核酸扩增方法,具有操作简单、特异性强、产物易检测等特点。在DNA合成时,...
RPA-LFS技术作为一种新型等温扩增核酸检测技术,由于其操作便捷、时间成本低等优势,已广泛运用于病毒、细菌、真菌和寄生虫检测等领域[4]。本文将对RPA-LFS技术原理进行介绍并对该技术在诊断病原微生物中的应用研究进展进行综述。 一、RP...
RPA技术主要依赖于三种酶:能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性,最佳反应温度在37°C左右。 RPA重组酶聚合酶扩增原理示意图 3、RCA滚环扩增技术 原理:以环状 DNA 为模板,通过一个短的 DNA 引物(与部分环状模板互补),在 phi29 DNA...
RPA技术主要依赖于三种酶:能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性,最佳反应温度在37°C左右。 RPA重组酶聚合酶扩增原理示意图 3、RCA滚环扩增技术 原理:以环状 DNA 为模板,通过一个短的 DNA 引物(与部分环状模板互补),在 phi29 DNA...
RPA技术主要依赖于三种酶:能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性,最佳反应温度在37°C左右。 RPA重组酶聚合酶扩增原理示意图 RCA滚环扩增技术 原理:以环状 DNA 为模板,通过一个短的 DNA 引物(与部分环状模板互补),在 phi29 DNA 聚...